TIPOS DE MICROSCOPÍA:
1.1 Microscopía óptica normal (de campo brillante coloreado): El
material a observar se colorea con colorantes específicos que aumentan el
contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera.
1.1.1 Microscopía de campo brillante: el material se observa sin
coloración. La luz pasa directamente y se aprecian detalles que estén
naturalmente coloreados.
El microscopio en campo oscuro
utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el
espécimen. El campo de visión del objetivo se encuentra en la zona hueca del
cono de luz y sólo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las
porciones claras del espécimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos
minúsculos que se están analizando aparecen como una luz brillante sobre el
fondo. Esta forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos
transparentes y sin manchas, invisibles con iluminación normal.
1.1.2 Microscopía en contraste de fase: se usa principalmente para
aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las células sin
colorear. Es ideal para especimenes delgados, o células aisladas. El
microscopio de fase ilumina el espécimen con un cono hueco de luz, como en el
microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de
luz es más estrecho y entra en el campo de visión del objetivo, que contiene un
dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un
cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminación
provoca variaciones minúsculas en el índice de refracción de un espécimen
transparente, haciéndolo visible. Este tipo de microscopio es muy útil a la
hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en
biología y medicina
1.1.3 Nomarski, microscopía diferencial de contraste de interferencia
(DIC). Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imágenes combinadas aparecen
como si la célula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseñado
para observar relieves de especimenes muy difíciles de manejar, es muy
utilizado en los tratamientos de fertilización in-vitro actuales. DIC se usa
cuando el espécimen es muy grueso para usar contraste de fases.
Microscopía de fluorescencia: una sustancia natural en las
células o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz
de luz, emitiendo parte de la energía absorbida como rayas luminosas: esto se
conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se
observa como si viniera directamente del colorante.
Microscopio de fluorescencia:
Microscopio que incorpora una
lámpara especial, que actúa emitiendo una luz excitadora de los fluorocromos,
con los que se tiñen las muestras a observar, y que posee además un filtro
especial, que permite el paso de la luz emitida por el fluorocromo.
1.3 Un microscopio confocal es un microscopio capaz de obtener imágenes
tridimensionales de la célula. Se basa en un principio similar al de un
microscopio de fluorescencia, pero se utilizan dos diafragmas confocales (uno
antes de la muestra y otro después) capaces de enfocar la iluminación en un
único punto de la muestra. Se utiliza un láser como fuente luminosa, y con él
se va barriendo la muestra por todo su volumen, plano a plano, creando muchas
imágenes bidimensionales que un ordenador interpreta, generando finalmente una
imagen tridimensional del objeto.
Mantenimiento y limpieza.
1- Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el
objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la
parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo
cubierto con su funda.
2- Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que
mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las
lentes.Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja
dentro de un armario para protegerlo del polvo.
Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se
ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un
papel de óptica.
4- No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no
se está utilizando el microscopio.
5- Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que
limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica
o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el
papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza,
porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y
su sujeción.
6- No forzar nunca los tornillos giratorios del
microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador).
El cambio de objetivo se hace girando el revólver y
dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente
con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo
ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
8- Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si
se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de
aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
9- Es conveniente limpiar y revisar siempre los
microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a
un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
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